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Table 1 Binding site of the last 10 nucleotides of reverse primer, AE982 to positive samples and sequences with highest similarity percentage. First row of the table represents the position of the nucleotide on the CytB gene. Two samples were observed with G/T misbinding on the 3’-end of reverse primers post sequencing whereas twelve samples were observed to have exact sequence with Haemoproteus-specific primer. Possible insertion or deletion at binding site were reconfirmed by sequencing visible amplicons of 1773 bp size under UV light from the first round consensus PCR. Highlighted yellow: AE982 reverse primer sequence from 5’-end; Highlighted blue: sequence at primer binding site of positive samples; Highlighted green: sequence at primer binding site of reference with highest match; Highlighted orange: mismatch nucleotides to primer sequence. Dots ‘⋅’ represents similar nucleotide with primer nucleotide

From: Prevalence of haemosporidia in Asian Glossy Starling with discovery of misbinding of Haemoproteus-specific primer to Plasmodium genera in Sarawak, Malaysian Borneo

Position at CytB gene

5'

1034

1035

1036

1037

1038

1039

1040

1041

1042

1043

3'

Reverse primer AE982 (Haemoproteus)

 

A

T

R

W

A

R

A

T

A

G

 

OP321162 pFANTAIL01_BP_26

 

・

・

G

T

・

G

・

・

・

T

 

OP321157 pALPSIS01_BP_29_C6

 

・

・

A

T

・

G

・

・

・

T

 

OP321166 pFANTAIL01_BP_22

 

・

・

G

T

・

G

・

・

・

・

 

OP321165 pFANTAIL01_BP_16

 

・

・

G

T

・

G

・

・

・

・

 

OP321168 pFANTAIL01_BP_28

 

・

・

G

T

・

G

・

・

・

・

 

OP321167 pFANTAIL01_BP_27

 

・

・

G

T

・

G

・

・

・

・

 

OP321159 pFANTAIL01_BP_8

 

・

・

G

T

・

G

・

・

・

・

 

OP321163 pFANTAIL01_BP_19

 

・

・

G

T

・

G

・

・

・

・

 

OP321158 pALPSIS02_BP_4_C7

 

・

・

G

A

・

G

・

・

・

・

 

OP321155 pFANTAIL01_BP_24

 

・

・

G

T

・

G

・

・

・

・

 

OP321156 pFANTAIL01_BP_15

 

・

・

G

T

・

G

・

・

・

・

 

OP321164 pFANTAIL01_BP_21

 

・

・

G

T

・

G

・

・

・

・

 

OP321160 pCOLL4_BP_3

 

・

・

G

T

・

G

・

・

・

・

 

OP321161 pACCBAD01-BP_83

 

・

・

G

T

・

G

・

・

・

・

 

MF442548 Plasmodium_MDG_P12

 

・

・

G

T

・

G

・

・

・

T

 

GQ395660 Plasmodium_LA20TRMB

 

・

・

G

T

・

A

・

・

・

T

 

KY653751 Plasmodium_OHA1

 

・

・

G

T

・

A

・

・

・

T

 

KJ499987 H. macrovacuolatus

 

・

・

G

T

・

A

・

・

・

・